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慢病毒構(gòu)建并包裝后，以進行貼壁細胞或懸浮細胞的轉(zhuǎn)染。具體流程如下： 1. 對慢病毒基因進行改造，即敲除U3端的400bp的特定基因，使其逆轉(zhuǎn)錄和整合的能力，但保留產(chǎn)生病毒顆粒必須的蛋白的能力。 2. 向上述基因中插入目的基因。與具有包裝功能的質(zhì)粒同時進行對包裝細胞的轉(zhuǎn)染。在細胞上清中獲得攜帶目的基因的復制缺陷型慢病毒載體顆粒。

三種擴大貼壁細胞培養(yǎng)的方法：維持其在培養(yǎng)皿表面（2D）的生長狀態(tài)，進行傳代培養(yǎng)放大；進行貼壁細胞分離，隨后在發(fā)酵罐的3D培養(yǎng)中進行小試到大規(guī)模的逐級放大；采用含有微載體的攪拌發(fā)酵罐進行培養(yǎng)。2D培養(yǎng)即采用多培養(yǎng)皿或多層搖瓶進行培養(yǎng)放大。

傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進行培養(yǎng)的過程。$n$n原理：細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，須進行傳代再培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系獲得的具有特殊性質(zhì)的細胞。因此，欲構(gòu)建細胞株，首先需獲得穩(wěn)定的細胞系。構(gòu)建流程如下： 1. 細胞培養(yǎng)（原核：大腸桿菌，真核：CHO細胞） 2. 質(zhì)粒的瞬時轉(zhuǎn)染。 3. 向轉(zhuǎn)染后的細胞培養(yǎng)基中加入抗生素規(guī)定濃度的抗生素進行穩(wěn)定細胞株篩選。 4. Western blot或ELISA檢測蛋白的表達情況，篩選比較高克隆進行傳代并保存

凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。人或動物體內(nèi)（或胚胎組織）由于多種細胞結(jié)合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。