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蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色,通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的分子生物學技術。
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ARTICLES蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色,通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的分子生物學技術。
采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行蛋白質(zhì)樣品的分離,隨后將蛋白轉移到硝酸纖維素薄膜上進行固定。固定的目的蛋白即為抗原,因此加入適量的對應抗體進行免疫反應,能與抗體緊密結合的抗原及為目的蛋白。而后加入有標記的二抗或酶,因此結合的抗原-抗體可被檢測到。
大致流程如下:
1. 蛋白質(zhì)的樣品制備
2. 蛋白質(zhì)定量
3. 蛋白質(zhì)樣品SDS-PAGE電泳
4. 轉PVDF膜或硝化纖維膜
5. 免疫雜交反應
6. 化學發(fā)光(ECL),顯影,定影
7. 凝膠圖象分析
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