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ARTICLES凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。人或動物體內(或胚胎組織)由于多種細胞結合緊密,不利于各個細胞在體外培養中生長繁殖,必須將現有的組織塊充分散開,使細胞解離出來。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
酶聯免疫吸附測定enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。分為夾心法,間接法和競爭法三種。
ChiRP(Chromatin Isolation by RNA Purification )是一種檢測與RNA綁定的DNA和蛋白相互作用的方法。該方法是通過設計生物素或鏈霉親和素探針,把目標RNA拉下來以后,與其共同作用的DNA染色體片段就會附在到磁珠上,后通過qRT-PCR、測序、免疫印跡法和質譜分析等確定目的RNA、DNA和RNA結合蛋白(RBPs)。
研究DNA結合蛋白與其靶DNA之間相互作用的主要實驗手段之一。原理及流程如下: 鏈親和素磁珠能夠與生物素標記DNA/蛋白復合物結合。在磁場下或通過離心使結合物與上清液分離,吸棄上清液并洗滌磁珠,然后用SDS樣品液使蛋白變性而與磁珠分離。分離液中的蛋白質用SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)或雙向電泳分離,SDS PAGE用高靈敏度考馬斯亮藍(CBB)染色。然后從染色膠上切下所需蛋白帶進行質
RNA pull down實驗 檢測RNA結合蛋白與其靶RNA之間的相互作用。使用體外轉錄法標記生物素RNA探針,然后與胞漿蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白質復合物。該復合物可與鏈親和素標記的磁珠結合,從而與孵育液中的其他成分分離。復合物洗脫后,通過western blot實驗檢測特定的RNA結合蛋白是否與RNA相互作用。
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