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TECHNICAL ARTICLES蛋白標記定量技術——艾柏森生物
蛋白質標記定量技術是蛋白質組學研究中的重要組成部分,它允許科學家們對蛋白質的表達水平進行精確的測量和比較。這些技術在生物醫學研究、藥物開發、疾病診斷等領域有著廣泛的應用。以下是一些主要的蛋白質標記定量技術:
iTRAQ (Isobaric Tag for Relative and Absolute Quantitation):這是一種體外標記技術,通過使用不同的同位素標簽對樣品中的肽段進行標記,然后通過質譜分析比較不同樣品中蛋白質的相對含量。iTRAQ技術可以同時比較多達10種不同樣本中蛋白質的相對含量,適用于研究不同病理條件下或不同發育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異 。
TMT (Tandem Mass Tags):與iTRAQ類似,TMT也是一種體外標記技術,使用不同的同位素標簽對肽段進行標記。TMT技術可以同時分析多達10個樣本,特別適合于比較不同處理方式或來自多個處理時間的樣本的差異蛋白分析 。
Label-Free Quantitation:這是一種非標記定量策略,不依賴于同位素標記,而是通過比較不同樣品中相應肽段的信號強度來對蛋白質進行相對定量。這種方法操作簡單,不需要昂貴的同位素標簽,但對樣品制備和質譜操作的質量要求較高 。
SILAC (Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture):這是一種體內標記技術,通過在細胞培養過程中使用穩定同位素標記的氨基酸,使得新合成的蛋白質帶有同位素標簽。SILAC技術可以用于比較不同細胞狀態下蛋白質的表達水平 。
SWATH-MS (Sequential Window Acquisition of All Theoretical Mass Spectra):這是一種數據非依賴型采集模式的質譜技術,通過系統地掃描所有預定質量窗口來收集質譜數據,提供高通量、高重復性的定量信息,適合復雜樣品分析 。
Proximity Labeling:這是一種研究蛋白質相互作用的技術,通過將具有鄰近標記功能的酶與目標蛋白融合,將鄰近的蛋白標記上生物素,然后通過親和素磁珠富集生物素標記蛋白進行質譜鑒定,分析目的蛋白的互作或鄰近的蛋白信息 。
MRM (Multiple Reaction Monitoring):這是一種高度選擇性和靈敏度的定量蛋白質譜方法,通過檢測多個預定義的肽段來實現對特定蛋白質的定量分析。MRM技術具有靈敏度和準確性,能夠在復雜樣品中準確測量目標蛋白質的濃度 。
這些技術各有優勢和局限性,選擇合適的技術需要根據研究目的、樣品類型、實驗條件和預算等因素綜合考慮。
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