對于
抗體制備有了質量好的抗原,還必須選擇適當的免疫途徑,才能產生質量好(特異性強和效價高)的抗體。
在免疫期間,不僅各個不同的動物,而且同一動物在不同的時間內抗血清效價、特異性、親協力等都可能發生變化,因而必須經常地采血測試。只有在對抗血清的效價、特異性、親協力等方面作*的評價后,才可使用所取得的抗血清。
抗體制備抗血清的特異性測定:
抗血清的特異性或稱專一性是指抗血清對相應的抗原及近似的抗原物質的識別能力。特異性好就是抗血清的識別能力強。通常,特異性是以交叉反應率來表示的。交叉反應率低,表示抗血清的特異性好,反之則特異性差。交叉反應率一般是用競爭抑制曲線來判定的。以不同濃度的抗原和近似抗原物質分別做競爭抑制曲線,計算各自的結合率(B/T或B/B0),求出各IC50時的濃度,按下列公式計算交叉反應率。
S=y/Z×100%;
S-交叉反應率,y-IC50時抗原濃度,Z-IC50時近似抗原物質的濃度。
如某抗原的IC50濃度為90Pg/管,而一些近似抗原物質IC50濃度幾乎是無窮大,可以說這一抗血清與其它抗原物質的交叉反應率近似零,即無交叉反應,該抗血清的特異性是好的。
免疫細胞化學的技術關鍵之一是制備特異性強、親協力大、滴度高的特異性抗體,由于每種抗原都有幾個抗原決定簇,用它免疫動物將產生對各個決定簇的抗體,即多克隆抗體。單克隆抗體則是由一個產生抗體的細胞與骨髓瘤細胞融合而形成的雜交廇細胞經無性繁殖而來的細胞群所產生的,所以它的免疫球蛋白屬同一類型,質地純一,而且它是針對某一抗原決定簇的,因此特異性強,親合性也一致。